GV3101

價格:1500元

聯系方式:I47-825O-882O

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農桿菌根癌農桿菌感受態細胞基本信息

菌種名稱: GV3101、GV3101感受態細胞、GV3101根癌農桿菌
英文名稱: Agrobacterium tumefaciens
中文名稱: 根癌農桿菌,根癌土壤桿菌
基因型: C58 (rifR) Ti pMP90 (pTiC58DT-DNA) ( gentR) Nopaline
抗性: 利福平(工作濃度20ug/ml)和慶大霉素(工作濃度40ug/ml)
生長條件 28度,需氧
培養基: LB培養基或者YEB培養基
轉化方法: 化學轉化,或者電轉化
產品應用 擬南芥、煙草、玉米、土豆等植物的轉基因操作。
生長條件: 37 ℃,  有氧
菌株說明: GV3101菌株為C58型背景,核基因中含有篩選標簽——利福平抗性基因rif,為了便于轉化操作,此菌株攜帶一無自身轉運功能的胭脂堿型Ti質粒pMP90 (pTiC58DT-DNA),此質粒含有vir基因 (vir基因是T-DNA插入植物基因組必需的元件,pMP90 (pTiC58DT-DNA)質粒自身的T-DNA轉移功能被破壞,但可以幫助轉入的雙元載體T-DNA順利轉移)。pMP90 (pTiC58DT-DNA)型Ti 質粒含有篩選標簽:gent,賦予GV3101菌株慶大霉素抗性,適用于擬南芥、煙草、玉米、土豆等植物的轉基因操作,本公司生產的GV3101化學轉化感受態細胞經特殊工藝制作,pCAMBIA2301質粒檢測轉化效率>104 cfu/μg DNA。

GV3101化學感受態細胞操作方法


1. 取-80℃保存的農桿菌GV3101感受態細胞于室溫或手心片刻待其部分融化,處于冰水混合狀態時插入冰中。
 
2.每100 μl感受態加入0.01-1 μg質粒DNA(轉化效率較高,第一次使用前最好做預實驗確定所加質粒的量),用手撥打管底混勻,依次于冰上靜置5分鐘、液氮5分鐘、37℃水浴5分鐘、冰浴5分鐘。
 
3. 加入700 μl無抗生素的LB培養基或YEB液體培養基,于28℃振蕩培養2~3小時。
 
4. 6000 rpm離心一分鐘收菌,留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊涂布于含相應抗生素的LB或YEB平板上,倒置放于28℃培養箱培養2-3天
 
(當平板只含有50 μg/ml kan 時,28℃培養48 h即可;平板中同時加入50 μg/ml kan,20 μg/ml rif 時,需28℃培養60 h;如果使用的平板含有50 μg/ml rif 則需要28℃培養72-90 h)。


注意事項
 
1. 加入質粒時體積不應大于感受態體積的1/10;質粒不純或存在乙醇等有機物污染,轉化效率急劇下降;質粒增大一倍,轉化效率下降一個數量級。
 
2. 混入質粒時應輕柔操作。轉化高濃度的質粒可相應減少最終用于涂板的菌量。
 
3. 平板上陽性克隆密度過大時,由于營養不足,陽性克隆生長變慢,菌落變小,為了獲得大的菌落,應減少質粒用量。
 
4. 利福平濃度不應高于25 μg/ml,過高的利福平濃度不利于農桿菌生長,會降低其生長速度和轉化效率。本公司感受態計算轉化效率時所用平板只含有50 μg/ml kan,若所用平板含有20 μg/ml rif則轉化效率降低到1/2。
 
5. 培養基中加入利福平的目的是防止雜菌生長、篩選農桿菌;根據所用菌株抗性加入Ti質粒篩選抗生素可防止Ti質粒丟失,但Ti質粒篩選抗生素不利于農桿菌的轉基因操作,所以一般培養農桿菌時不考慮這些抗生素,Ti質粒丟失的概率極低(可以忽略)。


備注
1、農桿菌相關抗生素配方:
抗生素 配方 原液 工作液
羧芐青霉素(carb) 雙蒸水溶解,0.22 μm濾膜過濾除菌 50 mg/ml 50 μg/ml
硫酸卡那霉素(kan) 雙蒸水溶解,0.22 μm濾膜過濾除菌 50 mg/ml 50 μg/ml
鏈霉素(strep) 雙蒸水溶解,0.22 μm濾膜過濾除菌 10 mg/ml 50 μg/ml
利福平(rif) DMSO溶解,0.22 μm濾膜過濾除菌 10 mg/ml 20 μg/ml
慶大霉素(gent) 雙蒸水溶解,0.22 μm濾膜過濾除菌 20 mg/ml 40 μg/ml

2、常用農桿菌抗性:(R:抗;S:敏感。)
農桿菌菌株 羧芐青霉素(carb) 鏈霉素(strep) 利福平(rif) 慶大霉素(gent) 硫酸卡那霉素(kan)
AGL-1 R S R S S
EHA101 S S R S R
EHA105 S S R S S
LBA4404 S R R S S
GV3101 S S R R S

農桿菌根癌農桿菌感受態細胞特點和簡介

農桿菌根癌農桿菌感受態細胞制備方法

農桿菌根癌農桿菌感受態細胞操作方法

農桿菌根癌農桿菌感受態細胞注意事項

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農桿菌根癌農桿菌感受態細胞應用舉例

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